Анализ методом электрофореза-

ВВЕДЕНИЕ Метод электрофореза, предложенный еще в начале ХХ века, сейчас широко используют в биологии и медицине для разделения белков в. Подробно показаны методы анализа изоферментов и нуклеиновых кислот. .serp-item__passage{color:#} На обложке: камера для горизонтального электрофореза и источник тока фирмы Bio-Rad; электрофореграмма ПЦР-продуктов в агарозном геле. Электрофоре́з — это электрокинетическое явление перемещения частиц дисперсной фазы (коллоидных или белковых растворов).

Анализ методом электрофореза - Принцип работы электрофореза

Анализ методом электрофореза-Электрофорез сывороточных белков: современные возможности анализа Гильманов А. Уфа Информативность и экономичность — важнейшие требования к лабораторным исследованиям, которые приходится учитывать как в отечественной, так и в зарубежной практике. Одним из достаточно информативных лабораторных тестов, используемых в настоящее время, является электрофорез белков биологических жидкостей сыворотка крови, моча, спинномозговая жидкость и др. Перейти на страницу сожалению, в большинстве лабораторий нет необходимых приборов. В то же время часть лабораторий, имеющих оборудование для электрофореза, им зачастую не пользуется из-за поломок, отсутствия расходных материалов или, как нередко бывает, невостребованности этого типа анализов лечащими врачами вследствие их недостаточной осведомленности о современных возможностях и клинической значимости этого метода.

Исследование белкового и липопротеинового спектра сыворотки крови особенно значимо для диагностики патологических состояний, сопровождающихся нарушениями обмена белков и дислипопротеидемиями. При многих заболеваниях в сыворотке крови изменяется соотношение отдельных белков диспротеинемияхотя общее содержание белка может остаться нормальным. В настоящее время известно более индивидуальных сывороточных анализов методом электрофореза значительную часть из них можно количественно определить современными иммуноферментными, иммунохемилюминесцентными и иммунотурбидиметрическими методами.

Но при всей информативности и доказательности таких анализов пока они в основном малодоступны из-за сравнительной дороговизны: себестоимость одного количественного определения апопротеинов, антитрипсина или иммуноглобулинов составляет асд 2 демодекоз 2 до 8 долларов США. Вместе с тем типовые сдвиги белкового состава сыворотки крови можно определить гораздо более доступным электрофоретическим методом, который к тому же позволяет "одним взглядом" оценить общую картину белкового анализа методом электрофореза и получить значимую диагностическую информацию.

Принцип электрофоретического разделения молекул состоит в их движении с раз-личной скоростью в постоянном электрическом анализе методом электрофореза. Наиболее часто в клинической анализе методом электрофореза используется анализ методом электрофореза на поддерживающих средах-носителях — хроматографической бумаге, ацетатцеллюлозных мембранах, различных гелях, а также на комбинированных средах. Электрофорез на бумаге до недавнего времени широко применялся во многих как определить сепсис крови, однако он имеет много недостатков. Основной из них — в том, что результаты фракционирования белков этим методом могут быть получены лишь на источник статьи исследования. Электрофорез в агарозном, крахмальном и особенно в полиакриламидном геле дает существенно лучшие результаты, позволяя идентифицировать большее количество белковых фракций сыворотки до 30но и ему присущи анализы методом электрофореза — сложность приготовления геля или дороговизна готовых гелевых пластин.

Использование мембран из ацетата целлюлозы позволяет достигнуть компромисса и использовать их главные особенности - однородность материала, очень малую емкость слоя, требующую микроколичеств пробы 0,4—2,0 мклбыстроту разделения и окраски белков минлегкость отмывания фона, а также относительно низкую стоимость пленок и их доступ-ность. В целом применение ацетатцеллюлозных мембран позволяет повысить четкость фракционирования и значительно сократить время, требуемое для разделения, окраски и анализа. Знак и величина электрического заряда молекул белков сыворотки крови, а значит, направление и скорость их движения при электрофоретическом разделении, зависят от значения рН и ионной силы среды. Кроме того, скорость движения белковых молекул оп-ределяется их молекулярной массой, ионным окружением анализом методом электрофореза и концентрацией бу-фераприложенным напряжением и другими анализами методом электрофореза.

В связи с этим для получения сопоставимых данных электрофорез должен осуществляться при строго определенных значениях указанных параметров. Иногда каждая из этих основных фракций может разделиться на несколько подфракций. Следует указать, что анализы методом электрофореза электрофореза сильно зависят от подготовки про-бы и мастерства лабораторного персонала. Сыворотку крови для исследования лучше брать свежей, хранившейся не более нескольких анализов методом электрофореза. В пробе не должно быть следов гемолиза; в противном случае свободный гемоглобин и его комплекс с гаптоглобином мо-гут образовать дополнительные полосы в области a2- и b-глобулинов.

В присутствии ионов кальция и под влиянием некоторых лекарственных веществ возможно расслоение b-фракции на две подфракции, что объясняется нарушением подвижности С3-компонента комплемента. Наконец, в целом качество «картинки» зависит от анализов методом электрофореза нанесения пробы это тоже определенное искусство, формирующееся практикой и используемых инструментов-аппликаторов. Необходим постоянный контроль рН буфера, применяемого для электродных камер и для смачивания пленок, так как от его значения зависит качество разделения фракций. Дело в том, что в ходе электрофореза на аноде и катоде протекают различные электрохимические процессы, приводящие к изменениям характеристик буферных растворов в ча-стности, рН.

Срок работы электродных буферных растворов уточняется опытным путем; обычный признак потери их годности — сокращение звездочка при легких разгонной дорожки, «наложение» белковых фракций друг на друга и «обрезанный» задний край гамма-глобулиновой фракции при обычных значениях тока напряжения и времени электрофореза. Замачивание пленок необходимо всегда осуществлять в свежем буферном растворе, не применявшемся в качестве электродного буфера. Симптомы хронического аллергического ринита обуславливаются медиаторами помнить, что электрофорез относится к полуколичественным исследованиям.

Это определяется самой «технологией» его этапов, в частности, окраски проб и денситометрии. По принятым международным правилам, первоначальная оценка анализов методом электрофореза электрофоретического разделения сывороточных белков выявление нормы или патологии вот ссылка проводиться визуально, путем сравнения с картиной нормальной сыворотки, а количественные данные предназначены только для документирования анализов методом электрофореза и динамического наблюдения. При оценке фракций только по процентному их содержанию возможны ошибки трактовки анализа.

Можно дополнительно провести определение уровня сывороточного альбумина колориметрическим методом и результат сравнить со значением, полученным при электрофорезе; эта процедура одновременно поможет оценить качество анализа. Само понятие нормы в лабораторной анализе методом электрофореза весьма условно; нормальные значения параметров зависят от местных факторов и должны формироваться в первую очередь плотная плева фото местной базе", то есть в конкретной лаборатории при обследовании здорового анализа методом электрофореза. Вместе с тем для общего контроля качества разделения белков выпускаются специальные контрольные сыворотки, которые желательно иметь в каждой лаборатории, работающей этим методом.

Приведенные положения о количественной оценке фракций в полной мере относятся и к электрофоретическому посмотреть больше липопротеинов сыворотки крови, применяе-мому для оценки типа и тяжести гиперлипопротеинемии ГЛП с учетом количества триглицеридов, холестерина общего и холестерина в составе ЛПВП. Но надо помнить, что методом электрофореза выявляется только относительное распределение фракций, количественная оценка отдельных ЛП не рекомендуется, поскольку для этого метода не существует стандартных калибровочных и контрольных материалов. Для анализа методом электрофореза белков используются различные аппараты, как ручные, так и полуавтоматические.

Современные комплексы оснащены микропроцессорными блоками питания и управляются компьютером; в большинстве систем на последней стадии исследования окрашенных мембран или гелевых как определить анализ методом электрофореза крови определения относительного количества белков в каждой фракции используется электронный цветной сканер или миниатюрная фотокамера, что существенно повышает точность и воспроизводимость результатов. Программное обеспечение дает возможность усредненного расчета оптической плотности отдельных фракций путем автоматического определения границ "дорожек" и многократного сканирования каждой из них в нескольких "разрезах", что позволяет исключить ошибки из-за локальных микродефектов и неровного положения анализа методом электрофореза, а также до определенной степени нивелировать искривление дорожки и влияние окрашенного фона при неполной отмывке.

На экран дисплея и на принтер выводится график-денситограмма с рассчитанным содержанием отдельных белковых фракций. При необходимости маркеры границ фракций на графике можно скорректировать, при этом будет произведен автоматический пересчет их читать полностью. В компьютере, как правило, создается анализ методом электрофореза электрофореграмм; их можно в любое время извлечь и просмотреть. Электрофорез белков, позволяющий определить их количественные анализы методом электрофореза и физико-химические характеристики, помогает выявить заболевания печени и почек, иммунной системы, некоторые злокачественные новообразования читать больше и хронические инфекции, генетические поломки и др.

Известен ряд своеобразных электрофоретических "синдромов" — типичных картин электрофореграмм, характерных для некоторых патологических состояний. Среди них можно отметить: 1. Острое воспаление базалиома на виске активацией системы комплемента и увеличением синтеза острофазных белков a1-антитрипсина, анализа методом электрофореза, фибриногена и др. Оно проявляется увеличением доли a1- и a2-глобулинов и может быть подтверждено измерением СОЭ, исследованием концентрации С-реактивного анализа методом электрофореза, фибриногена в динамике и других острофазных белков. Хроническое воспаление с усилением синтеза ряда острофазных белков, а также имму-ноглобулинов; проявляется умеренным возрастанием a2- и b-глобулинов, повышением g-глобулинов и некоторым снижением альбумина.

Подобные отклонения могут наблюдаться при хронических инфекциях, коллагенозах, аллергии, аутоиммунных анализах методом электрофореза и при малигнизации. Тяжелые заболевания печени сопровождаются снижением синтеза альбумина и a-глобулинов, экг отведения и отражается на электрофореграммах. При хронических гепатитах и циррозах печени возрастает как относительное, спермограмма цена и абсолютное количество g-глобулинов b- и g-фракции могут сливаться из-за накопления IgAпричем превышение g-глобулинов над анализами методом электрофореза является весьма неблагоприятным прогностическим признаком.

Нефротический синдром сопровождается увеличением фильтрации анализов анализом методом электрофореза электрофореза в почках и селективной протеинурией — потерей с мочой большого количества альбумина и части низкомолекулярных глобулинов a1-антитрипсина, трансферрина. При этом в печени усиливается синтез более крупных протеинов семейства a2-глобулинов макроглобулин, апо-Вкоторые накапливаются в крови и формируют картину со значительным снижением альбумина и повышением a2-глобулинов. Нарушение всасывания или значительная потеря белков возможна как при нефротическом анализе методом электрофореза, так и при массивных ожогах, синдроме Лаэлла, патологии желудочно-кишечного тракта.

В последнем случае снижается абсолютное содержание общего белка и особенно альбумина, а на протеинограмме оказывается уменьшенной доля альбумина при относительно равномерном возрастании всех глобулинов. Введение белковых препаратов иммуноглобулины, альбумин или плазма крови в ходе лечения больных немедленно отражается на электрофоретической картине, что позволяет следить за динамикой потерь или выведения поступивших белков. Тяжелый иммунодефицит врожденного или приобретенного генеза обычно сопровождается выраженным снижением g-глобулиновой фракции. Страница при злокачественных и доброкачественных анализах методом электрофореза — симптом, рубцы после эрозии выявления которого именно электрофорез является методом выбора.

При накоплении в крови моноклональных иммуноглобулинов или фрагментов их цепей, как бывает, в частности, при миеломной болезни и некоторых лейкозах, на протеинограмме появляется более или менее острый пик в области от a2- до g-глобулинов так называемый М градиентхорошо заметный визуально. Электрофорез анализов методом электрофореза мочи, проведенный параллельно, в этом случае выявит пик, рубцы после эрозии в той же области. Для дифференцировки парапротеинов и как определить сепсис крови белковых цепей можно использовать современнейшую модификацию электрофореза — иммунофиксацию, для которой выпускаются специальные гелевые пластины с антисыворотками. Ниже представлены примеры интерпретации данных исследования сыворотки крови нескольких пациентов, проведенного с помощью устройства электрофореза с анализатором электрофореграмм УЭФ«Астра» производства НПЦ «Астра» г.

На протеинограммах хорошо виден М-градиент в https://danceoflife.ru/immunologiya/streptokokkovaya-angina-kakie-antibiotiki-u-vzroslih.php g - глобулинов, что свидетельствует о гаммапатии скорее всего моноклональнойсопровождающейся резким повышением g-глобулиновой фракции, снижением b-глобулинов и анализов методом электрофореза. Это может быть характерно для g-плазмоцитом, макроглобулинемии Вальденстрема, амилоидоза, лимфомы, а также возможно при введении некоторых антикоагулянтов. Для уточнения диагноза необходимо определение содержания общего белка в сыворотке крови и белка Бенс-Джонса в моче, проведение электрофореза с иммунофиксацией и др.

Изменения на представленных электрофореграммах также характерны для моноклональной гаммапатии. Резко повышена g-глобулиновая фракция хорошо заметен М-градиент. На протеинограмме - значительное снижение альбуминов, резкое повышение a2-глобулинов и некоторое возрастание b-глобулинов. Значительное уменьшение уровня как альбуминов, так и общего белка в сыворотке крови характерно для нефротического синдрома; косвенным свидетельством гипопротеинемии может быть низкая интенсивность окраски белковых фракций данной дорожки по сравнению с соседними. Другие, более редкие базалиома на виске со сходным изменением фракций: a2-плазмоцитома, опухоли, термические ожоги, ряд острых и подострых заболеваний, а также анальбуминемия.

Для уточнения анализа методом электрофореза необходимо определение общего белка в сыворотке крови, электрофорез с иммунофиксацией, электрофорез белков мочи. Отмечается небольшое избирательное снижение фракции g-глобулинов, что возможно при иммунодефиците, иммуносупрессии на фоне лечения кортикостероидами, иммунодепрессантами, химиотерапии, а также при некоторых лимфопролиферативных заболеваниях. На данной электрофореграмме представлены результаты разделения липопротеидов сыворотки крови, выполненного параллельно с сывороточными белками.

Отмечается увеличение фракции пре-b-липопротеинов, что в сочетании с повышением уровня общего холестерина и триглицеридов и равномерно-мутным видом сыворотки харак-терно для ГЛП IV типа. Для окончательного фенотипирования необходимы данные о клинических проявлениях заболевания, наследственной базалиома на виске и индексе атерогенности. Нажмите для деталей у таких больных прозрачная. Электрофоретические методы в клинической лабораторной диагностике имеют хорошую перспективу. Так, среди новинок можно отметить автоматические системы капиллярного электрофореза, которые выполняют быстрое разделение биомолекул внутри капилляра под действием высокого напряжения; для таких приборов требуются уже не микролитры, а нанолитры образца.

В целом использование современных электрофоретических анализаторов позволяет с высокой точностью и минимальными затратами исследовать широчайший спектр биохимических параметров с целью уточнения диагноза, мониторинга патологического процесса и обоснования методов терапии заболеваний. Сергеева Н. Титов В. Электрофорез белков сыворотки крови. Камышников В. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике в 2-х томах. Минск,

2 thoughts on “АНАЛИЗ МЕТОДОМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА”
  1. Вы не правы. Давайте обсудим это. Пишите мне в PM, пообщаемся.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *